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猪场血清学检测样品采集标准

2019-09-20 19:19:39来源：100唯尔

血清学检测,是猪场最广泛使用的检测方法之一.本案例中,笔者对江苏某猪场送检的193份血清样进行了猪瘟抗体、猪伪狂犬gB/gE抗体、猪圆环病毒抗体、猪蓝耳病毒抗体的检测和分析.结果显示该场后备母猪猪瘟免疫欠佳,猪伪狂犬病免疫不合格,猪蓝耳病抗体水平偏高;母猪猪伪狂犬病毒感染程度较高,猪呼吸与繁殖综合征普遍感染且抗体偏高;公猪猪圆环病毒抗体水平偏高商品猪猪瘟免疫效果不稳定猪蓝耳病感染比较普遍,且部分猪群抗体水平偏高,猪圆环病毒病免疫欠佳.结合该场免疫程序,表明该场后备母猪和商品猪的猪瘟、猪伪狂犬病免疫程序需要做适当调整;同时考虑通过测序了解本场的猪蓝耳病流行毒株,以确定合适的防控方案.

猪的抗体检测是指通过检测猪的血清或乳汁中的抗体含量，来反映机体感染或免疫保护情况的一种方法。实验室检测排除检测方法自身敏感性、稳定性与人为操作因素的影响外，检测结果是否对猪场有价值、准确还会受以下几方面因素影响。

1.影响因素

1.1猪只个体差异

不同猪只个体对病原微生物感染或疫苗免疫后反应不同，其体内抗体滴度也有很大的差异，因此，检测时要有足够的样品数量，满足统计学的需求，尽量降低个体差异对检测、分析造成的影响。

此外，猪只个体的差异还表现在不同胎次的母猪，对抗原反复接触后体内抗体滴度也存在差别，母猪按胎次采样，可用于分析猪群对疫苗免疫麻痹性的影响之外，也可以消除个体差异对检测结果、分析产生的误差。

1.2不同抗原的性质

抗原有两个基本特性：抗原性和免疫原性。抗原性指抗原与其所诱导产生的抗体或致敏淋巴细胞特异性结合的能力；免疫原性是指能引起免疫应答的性能，即抗原能刺激特定的免疫细胞，使免疫细胞活化、增殖、分化，最终产生免疫效应物质抗体和致敏淋巴细胞的特性。例如：同抗原(如疫苗和野毒)有不同的免疫原性，其对免疫系统的刺激是不同的，虽然都是先感染再产生抗体(首次感染期内一般只能检出抗原，抗体反应是滞后的)，但不同抗原产生抗体的时间是不同的。

1.3母源抗体的因素

猪只体内不同病原微生物的母源抗体的消长规律，峰值期各有不同，进行采样、检测与结果分析时都应考虑这些因素，否则，要么分析错误，要么成为无价值的检测。

1.4感染或免疫后的时间

感染或免疫后产生的抗体有其消长规律及持续时间，这就导致感染/免疫后不同阶段其抗体滴度是不同的，也会显示出很高的离散度。因此，样品采集时，需根据不同的目的，根据免疫时间或日龄分阶段采集符合统计学需求的样本。例如在伪狂犬野毒阳性猪场检测90日龄的仔猪gE抗体为阳性的，一定是伪狂犬野毒感染吗？伪狂犬的母源抗体持续期特别长，一般可维持至90日龄，所以如果是伪狂犬野毒阳性猪场，90日龄之前的仔猪野毒抗体阳性比例必然是比较高的，因此单纯检测是无法判断的。

1.5免疫次数或再次感染

猪只初次接触抗原和再次接触抗原，其抗体产生的速度和滴度是显著不同的。通过抗体滴度和免疫信息分析，可反映猪场是否存在野毒的感染。这需要建立在分阶段采样的意识上，对检测猪群进行合理的分组。

2.采样标准原则

综合上述影响结果的因素，猪场样本采集需要根据检测目的的不同，合理的进行分组，具体要求需要考虑以下几方面。

2.1样本有效性

样品数量：根据统计学一般规律，采样量20头时可信度达98%，30头时可信度达99%，40头时可信度达99.5%，50头时可信度达99.9%。

对下列猪群和猪场的采样比例做如下划分：

(1)公猪、后备种猪>怀孕母猪>产房母猪＞保育、育肥猪。

(2)检测重要性：祖代场>父母代场>商品场。

(3)在上述采样标准的前提下，祖代场和父母代场的采样比例需适当上浮10-20%。

2.2公猪与后备母猪的采样

根据猪场实际情况，如果猪精自供，建议定期对全部公猪的血清进行检测，每年采集2-3次，重点检测PRV和PRRSV等抗体；如果是外购，建议选择正规的厂家，并可要求出具检测报告。

后备母猪一般在进隔离舍后(确定后备进场后疫苗的免疫时间)，隔离1个月后 (检测驯化或被本场毒株感染情况)及混群前2周共进行3次采样检测，样本的比例为15%或至少10头；如果涉及伪狂犬阴性场引种、伪狂犬gE抗体需逐头检测，至少在进隔离舍后7d全部检测完成。如果发现有阳性，淘汰后在混群前还需全群检测，发现有gE阳性则坚决不能混群，直至连续两次间隔7d检测全阴性才可混群。