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动物疫病病原临床样品采集送检注意事项
动物疫病病原临床样品采集送检注意事项
张涛/中农威特生物科技股份有限公司
近年来，随着新发动物传染病的不断涌现，以及“老病”的继续肆虐，我国猪传染性疫病情况更加复杂，防控压力日益增大，严重危害着养猪业的健康发展，同时对养猪场造成巨大的经济损失。目前，我国针对动物传染性疾病采取的防控原则为：预防为主，防治结合。这就要求我们要搞好疫苗免疫接种工作，同时也要加强各种动物疫病病原体的检测，加强猪群一些传染性疫病抗体效价的检测，定期对疫苗免疫后进行抗体滴度的监测，做到以检测数据指导科学合理的制定免疫程序。由于许多养猪场从业人员专业能力普遍较低，个人防护意识较弱，经常出现采集的样品不能用，或者由于存放、运输不当，造成样品的不合格，进而影响检测结果的准确性，偶尔也有养猪场工作人员在样品采集过程中感染某些动物疫病，现就采样前准备、临床样品采集、保存和送检方法，其他的一些注意事项做简要介绍。
一、采样前个人防护和器械准备
1.个人防护。样品采集人员要充分认识到猪群可能感染有一些烈性的人兽共患病，在样品采集的过程中可能会通过直接接触、受损的黏膜等途径伤及采集人员，也可能经采集人员将病原体带到外界造成扩散。因此在样品采集前必须做好个人防护工作。穿戴安全可靠的的防护服（尽可能使用一次性高级别防护服）、一次性手套、防护帽、医用口罩、护目镜、胶鞋等。
2.器械。采集血液样品时尽可能使用一次性塑料采血针或真空采血管，分离组织样品时所有器械必须严格消毒，避免带入其他病原体。应根据猪只大小选择采血针头的大小，同时，准备碘伏、记号笔、抓猪器、耳标等器具。针对不同的采血对象选择合适针头；准备毛剪、消毒棉球、记号笔、自封袋等。
3.猪群。对猪群采集血液样品最好在早晨，动物空腹时进行。病死猪病理解剖应该有专业人员指导，谨慎操作，若发现血液凝固不良、天然孔出血等症状，怀疑为感染炭疽的病例时禁止解剖。采集的动物临床样品应该具有群体代表性。
二、血液样品的采集
血液是养猪场临床送检样品中最常检测的，主要是通过定期采集血液样品并分离血清进行一些动物疫病抗体水平的检测，用准确数据分析养猪场疫病防控压力，进而制定科学合理的免疫程序。
1.猪群选择。猪群接种疫苗后进行抗体水平监测采集的血液样品，应在疫苗免疫后3周采集，采取随机抽取样品的方式，通常采集30~100份血液样品就可以反映出所在猪群的整体疫苗免疫后抗体滴度情况。发病猪群采集血液样品送高级别实验室进行抗体检测和疫病确诊时，对所有出现典型临床症状或有疑似症状的猪只尽可能都采集血液样品进行检测，用于某些动物病毒检测的血液样品应在猪只发病初期，体温升高时采集。对于定期进行的猪场疫病监测及动物流行病学调查分析，采集样品时应根据猪群的数量按一定的比例随机抽取血液样品进行检测。
2.采集方法。最好选用一次性的注射器或者一次性的真空采血管，经耳缘静脉或前腔静脉采集，应根据猪只大小选择大小和长度都合适的针头，尽量找准位置，避免反复多次扎针，减少猪只的应激反应，采集血液量一般为为4~8ml。对于种猪，由于体型较肥大，一般采用耳缘静脉采集血液。具体步骤为：将种猪进行站立保定，擦洗干净耳朵，用力对耳缘静脉的近心端用力摁压，配合使用酒精棉球来回涂擦、拍打耳缘静脉使血管怒张，针头朝着耳尖方向刺入血管，缓慢抽取所需血液量，然后用干棉球进行压迫止血，对采集的血样及时进行标号。
对于小猪或架子猪，主要采用前腔静脉采血为主。小猪一般采用仰卧保定，用碘伏棉球对颈部皮肤消毒后，手持一次性兽用采血器轻轻扎向右侧凹窝，稍微偏向中央位置，回抽注射器，见有回血，缓慢抽取所需血液量；架子猪通常站立保定，用抓猪绳套住猪的上颌骨用力向前上方拉，使得猪的头颈部稍微上扬，可充分暴露猪的胸前凹窝，用碘伏棉球消毒凹窝处皮肤后，手持一次性兽用采血器，朝右侧胸前凹窝最低处垂直扎针，回抽采血器见有回血，缓慢抽动采血器活塞采集所需血液量，采血后用酒精棉球压迫止血。同时，对采集的血样及时进行标号。
3.血清的分离。血液采集后应稍微倾斜着室温或37℃放置1~2h，可加速血清的析出，之后使用离心机（5000转/min，离心5~10min）分离血清。若养猪场条件有限没有离心机，可多静置一段时间待血清完全析出后缓慢倒出上层清亮的血清，将分离的血清样品低温保存并尽快送检。
三、组织样品的采集
主要针对已出现临床症状的猪群采集组织进行相关病原体的检测。样品采集前要对使用的器械进行严格的消毒，准备相关的容器，同时对所检测的病原体采集何种组织样品应该有清晰的了解。采集多种不同部位的组织样品时不能只重复使用一套器械和容器。
1.采样猪的选择。最好挑选临床症状比较明显的猪。检测的病原体不同，所采集组织样品的侧重点也有所不同，对未确定检测的病原体应采集足够的组织样本，如果整群发病，应选择一定比例能代表整个群体发病特点的猪进行组织样品的采集。对于病死猪，应尽快采集组织样品，保证样品的新鲜，全面。对于其他有特殊条件要求的样本采集，一定要严格按照要求进行采样。
2. 样品的选择。尽可能选取有明显病理变化部位的组织样品，常见的组织样品，主要以淋巴结、扁桃体、内脏器官、流产胎儿、水泡皮、肠管、排泄物为主。采集的病料要具有典型的病变特征，应在发病猪濒死前或病死后短时间内快速完成，尽量不超过6 h，以充分保证样品的新鲜。同时，在病料采集过程中，应严格注意个人防护和无菌操作，防止人为带入外源病原体污染采集的组织样品，造成检测结果的不准确。
对于疑似细菌性病原体感染的病猪，在采集样品前5~7 d 禁止使用广谱的抗生素类药物，在组织样品采集过程中一定要尽量保证无菌操作，如果是采集的粪便，应该尽可能的新鲜，或者可以用棉拭子伸入直肠采集粪便。
对于疑似病毒性病原体感染的病猪，如能引起猪只蹄、鼻、口腔等部位出现水泡，溃烂的五种常见的水泡型病毒（口蹄疫、猪水疱病、水疱性口炎、猪水疱疹、塞内卡病毒A）的组织样品，应采集出现典型临床症状部位的组织（蹄冠、蹄叉、口腔部的水泡皮、水泡液）；能引起母猪流产、产死胎、木乃伊胎的病毒（猪繁殖障碍与呼吸综合征、猪细小病毒、乙型脑炎病毒）的组织样品，应采集发病母猪的淋巴结、扁桃体以及流产、畸形胎儿的脾脏；能引起猪腹泻的病毒（猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、轮状病毒、新型冠状病毒）的组织样品，应采集新鲜粪便、肠内容物、小肠肠管。对于采集的组织样品应应使用无菌容器密封保存，并在冷藏条件下尽快送检。
四、样品的保存和送检
科学的保存方法和快速有效的送检，是保证检测结果真实可信，指导后续疫病防治的重要环节，应切实遵循科学采样、低温密封保存、尽快送检，做好生物安全措施，防止疫病的传播，同时应加强环保意识，采集的样品检测后应进行无害化、分类处理，保证不污染生态环境。样品送检时要附带养猪场实际的生产资料，包括免疫程序、疫苗批号、厂家信息、猪群健康信息和饲养方式等，以方便检测人员能快速、全面、准确地检测样品和分析数据，同时能够及时准确地向养殖户反馈相关信息。
采集的血液样品，应尽量是血清样品，并且血清样品尽可能2℃~8℃冷藏保存，低温条件下尽快送检，一般从采样到送检的时间不超过7天，否则会造成样品中抗体效价的降低；对于全血样品，从采样到送检的时间一般不超过3天，否则会在送检途中会出现溶血现象，影响血清的分离，进而影响检测结果的准确性。
采集的检测细菌性病原体的组织样品，应在2℃~8℃低温条件下快速送检，最好不要冷冻。采集的检测病毒性病原体的组织样品，应在冷冻条件下短时间内快速送检，有条件的可以保存在小型液氮罐中快速送检，如果不能及时送检的，应先冻存在在-80℃超低温冰箱或液氮中，并尽快安排送检。
五、样品检测
对于待检样品，检测人员应做好样品信息登记工作，同时根据送检样品的不同性质，采取不同的科学检测方法开展快捷高效的样品检测和数据分析，及时向养殖户出具真实可信的样品检测报告，并对所发现的问题给予相关的意见和建议，指导养猪场进行科学合理的疫病预防、治疗以及净化工作。
来源：《兽医导刊》杂志第4期